检验原理
在正常情况下,人外周血中是没有分裂相的,只有在异常情况下才能发现。植物血球凝集素(PHA)是人类淋巴细胞有丝分裂的刺激剂,在PHA作用下,原处于G0期的淋巴细胞转化为淋巴母细胞,进而进行有丝分裂。利用PHA这一特性,淋巴细胞经过含有PHA培养液培养,在体外便可获得丰富的含有丝分裂的生长活跃的细胞群体,利用秋水仙素终止分裂中期的淋巴细胞,提供后续检验样品。
血球细胞核型分析是用于鉴别染色的有无异常状况。淋巴细胞通常不会进行细胞分裂,但在分裂素存在下,淋巴细胞会进行有丝分裂与染色体复制。在48~72小时以后,加入有丝分裂抑制剂可以细胞分裂停止于转位期。经过低张溶液、固定与染色,可以用显微镜观察染色体是否有异常状况。
产品信息
适应范围 | 外周血淋巴细胞体外增殖培养 | 生产日期与失效日期 | 详见产品标签 | 使用仪器 | 显微镜、二氧化碳细胞培养箱 |
储存条件及有效期 | 培养基应贮存在-20℃,有效期为2年,溶解后应存放于2-8℃,并于10天内使用。存放时注意避光。 |
样本要求
● 采血前不宜做剧烈运动。
● 可用干燥管、肝素抗凝管采血加塞送检。
● 避免采用溶血、乳穈状样品。
检验方法
1. 接种大约0.5毫升的肝素处理全血到5毫升外周血培养基中。
2. 于37°C培养69~72小时。
3. 加入0.05毫升的秋水仙酰胺溶液(Cat.No.12-004-1),继续于37°C培养20~30分钟。
4. 以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
5. 去除上清液,并将细胞悬浮于10毫升37°C低张0.075M氯化钙溶液中,继续于37°C培养15分钟。
6. 缓慢加入1毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3)轻轻摇晃混匀。
7. 以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
8. 去除上清液,敲散细胞。缓慢加入5毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3)轻轻摇晃混匀。
9. 以1500RPM离心7分钟收取血球细胞。
10. 去除上清液,敲散细胞。再一滴一滴地加入5毫升冰的固定液(醋酸:甲醇=1:3),于4°C静置20分钟。
11. 以1500RPM离心5分钟收取血球细胞。
12. 去除上清液,敲散细胞。将细胞悬浮于0.5~1毫升的冰的固定液中,再滴一滴细胞悬浮液到干净的载玻片上,风干玻片后进行染色。
13. 染色体染色可使用Orecin或Giemsa染色。Giemsa banding(G-Banding)是目前最常用的染色方法。可以使用胰酶-EDTA 10X(Cat.No.03-051-5)处理玻片再进行后续染色步骤。
产品检测
参考值(参考范围) | 细胞倍增指数大于1.5 |
检验结果的解释 | 细胞培养时间、加入秋水仙素的量以及低渗操作时间对结果影响较大,如发现制片所得的分裂相较少,需要对实验条件及样品进行确认 |
检验方法的局限性 | 仅用于外周血淋巴细胞培养 |
产品性能指标
装量差异限度 | ±3% | 澄清度 | 澄清度 | PH值 | 7.2-7.6 |
渗透压(mOsm/kg) | 280-340 | 内毒素(EU/ml) | <10 | 细胞生长实验 | 细胞倍增指数大于1.5 |
注意事项
● 本品仅用于体外诊断,不用于临床治疗,严禁内服,不能用嘴吸液。
● 试剂包装如有破损,严禁使用。
● 操作过程应避免污染。
● 操作人员在检验时应做好防护,预防血液病传播。
● 操作人员万一与皮肤、粘膜接触,请立即用自来水冲洗。
● 溶液应为澄清,如有沉淀物,严禁使用。
● 禁止使用超出规定有效期的产品。
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